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幾種血液中內(nèi)毒素的前處理測定方法

發(fā)布時間: 2022-12-05  點(diǎn)擊次數(shù): 826次

1)氯仿提取法:測定方法如下:

 

 

(2)稀釋加熱法:即水稀釋加熱法作為簡便的前處理方法被普遍采用,由于稀釋倍數(shù),加熱溫度和時間不同,結(jié)果也不全相同,其中主要方法見表6。

 

在這些方法中由于不確定因素太多,因此值得探索的地方很多。為了克服稀釋加熱法的缺陷,避免濁度生成,人們開發(fā)出了使用表面活性劑(0.04% TritonX -100)稀釋,805分鐘加熱處理方法。這個前處理方法,能得到很好的血漿內(nèi)毒素回收率。減少非特異性濁度所引起的假陽性反應(yīng)。尤其是日本和光純藥的Toxinonuter ET201采用比濁時間分析法檢測,能得到很好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

 

 

3)高氯酸法(PCA)與新高氯酸法(New PCA):所謂高氯酸法(PCA),即血漿加高氯酸后,產(chǎn)生的變性沉淀物用離心法除去,用上清液進(jìn)行比色測定。后來人們又發(fā)現(xiàn)這些沉淀物中含有內(nèi)毒素活性物質(zhì),因而對變性的血漿蛋白不進(jìn)行沉淀,而進(jìn)行現(xiàn)溶解處理,這就是新高氯酸法(New PCA),一般新高氯酸法的測定結(jié)果要比高氯酸法高8~10倍。

 

般高氯酸法只測定血中游離的內(nèi)毒素,而新高氯酸法可以將游離內(nèi)毒素和蛋白結(jié)合內(nèi)毒素一起測定出來。也就是說,新高氯酸的測定值減去高氯酸法的測定值,就等于結(jié)型內(nèi)毒素的量;我們可以同時使用兩種方法檢測以查明內(nèi)毒與蛋白的結(jié)合情況,并且可以對病人的病情發(fā)展進(jìn)行分析。具體測定方法如下所示:

 

 

另外,在我們對血漿中的內(nèi)毒素和鱟試驗(yàn)法檢測時,前處理加熱對血漿中和水中內(nèi)毒素影響要有一個認(rèn)識。細(xì)菌內(nèi)毒素在人體內(nèi)的分布往往以兩種方式存在,一種為游離型,另外一種為蛋白結(jié)合型。我們知道,細(xì)菌內(nèi)毒素在水中存在時對加熱是十分敏感的,而在血中的情況又是怎樣的?人們通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):血漿中的內(nèi)毒素在經(jīng)過100℃加熱1分鐘或10分鐘,其標(biāo)準(zhǔn)曲線沒有出現(xiàn)明顯的差別。而水中的內(nèi)毒素經(jīng)1分鐘加熱后,其標(biāo)準(zhǔn)曲線趨向平坦,10分鐘加熱后,接近水平。這可能是脂多糖分子在水中加熱后出現(xiàn)集結(jié)的原故。而在血漿的內(nèi)毒素則不同,團(tuán)塊的形成會受到血小板的抑制,內(nèi)毒素可與多種血液成分結(jié)合,如血小板﹑抗體、粘性蛋白等,這些物質(zhì)可能保護(hù)血漿內(nèi)毒素與LAL發(fā)生反應(yīng)。因此這就是加熱血漿也不會破壞其內(nèi)毒素的原因。


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